北京白癜风医学研究院 https://m-mip.39.net/nk/mipso_4518414.html尿路感染（UTI）是最常见的细菌感染之一，也是因发热而住院的常见原因。尿路感染的症状往往变化多端，特别是在老年人中，可能除了发烧外，一些典型的尿路感染症状如排尿困难和侧腹疼痛并不明显。已并发脓*血症的发热患者要进行早期抗菌治疗，需要快速准确的尿液分析，一旦证实存在尿路感染，适当的经验性抗生素治疗可以在患者入院后迅速开始，起到挽救生命的作用。
现在有多种不同的技术来确定尿路感染，这些方法中，有些快速但不太可靠，有些可靠但耗时。试纸测试速度快，诊断尿路感染具有很高的特异性，然而，由于灵敏度有限，试纸测试不太适合排除UTI。尿沉渣的显微镜检查可靠性一般，并且检验师必须接受培训，结果具有很高的个体差异。革兰氏染色是可靠性较高，但耗时、费力。尿道感染的*金标准仍然是尿液培养，但是该测试的结果至少需24至48小时后才能获得。
流式细胞术（FC）是确定尿路感染的一种新的、有希望和快速的诊断方法。以前的研究表明，通过FC计数尿样中的细菌比计数白细胞或尿沉渣中的细菌更可靠，可以预测尿培养阳性，敏感性为81-97％，特异性为78-94％。FC也能够预测尿培养阳性或阴性。然而，以往的研究中，细菌的总数包括非活菌和活菌。所以，新西兰的AnneH.Tavenier等人进一步使用噻唑橙和碘化丙啶区分尿液中的非活菌和活菌，以调查FC计数活菌的可靠性和预测尿培养结果的能力，发表在年8月16日的CytometryB杂志上。
总细菌计数染色步骤
1、10ml染色缓冲液加入到5ml尿液中，rpm离心5分钟。
染色缓液液配方：含0.01％Tween-20和1mmolEDTA的PBS
2、以5ml染色缓冲液重悬离心后的沉淀。
3、取5ul重悬样本，加入ul染色缓冲液（即稀释倍），加入ulSybrGreen，37度孵育10分钟。
4、上机获取50ul样本，低速获取。通过FSC和SSC将细菌与大颗粒区分开来，然后用SybrGreen（FL1通道检测）结合细菌核酸的特点分析细菌数量。
结果见下图：
区分活菌和非活菌
取5ul尿液，加入ulPBS，接着加入5ul噻唑橙（TO，42umol/L）和5ul碘化丙啶（PI，4.3mmol/L），室温孵育5分钟。活细菌由于膜完整，所以PI不会标记上，而TO可透膜，能标记活菌和非活菌。
上机获取50ul，低速。TO/nm通道，PI/通道。
结果见下图：
结果解读
一共19例尿培养阳性标本，例尿培养阴性标本。
（1）仅计数活菌，以2.01×10E5/ml为cut-off值，与金标准尿液培养对比，灵敏度％，特异度78.4％。
（2）计数总细菌数量，以4.79×10E6/ml为cut-off值，灵敏度89.5％，特异度83.6％。
流式检测尿液样本，速度快，灵敏度和特异度高，当然，还需要进行更大样本量的验证。未来，使用活菌测试，可以确定细菌耐药情况，并且结合Wada[2]和Gessoni[3]等人提出的方法，还可以区分革兰阳性菌和革兰阴性菌。
参考文献：
1.TavenierAH,deBoerFJ,MoshaverB,vanderLeurSJCM,StegemanCA,GroeneveldPHP.Flowcytometricanalysisofviablebacteriainurinesamplesoffebrilepatientsattheemergencydepartment.CytometryBClinCytom.Aug16.
2.WadaA,KonoM,KawauchiS,TakagiY,MorikawaT,FunakoshiK.RapiddiscriminationofGram-positiveandGram-negativebacteriainliquidsamplesbyusingNaOH-sodiumdodecylsulfatesolutionandflowcytometry.PLoSOne;7(10):e.(28)
3.GessoniG,SaccaniG,ValverdeS,ManoniF,CaputoM.Doesflowcytometryhavearoleinpreliminarydifferentiationbetweenurinarytractinfectionssustainedbygrampositiveandgramnegativebacteria?AnItalianpolycentricstudy.ClinChimActaFeb2;:-.
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